沉降菌測試標準操作規程

1、菌落：細菌培養后，由一個或幾個細菌繁殖而形成的一細菌集落，簡稱CFU。通常用個數表示。

2、測試方法：沉降法，即通過自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養基平皿，經48小時以上培養，在適宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落數，來評定潔凈環境內的活微生物數，并以此來評定無塵室的潔凈度。

3、所用的儀器和設備

1）高壓消毒鍋：使用時參照文件GZ-ZL-SOP-066-00進行操作。

2）恒溫培養箱：必須定期對培養箱的溫度計進行檢定。

3）培養皿：一般采用中90mm×15mm硼硅酸玻璃培養皿。使用前將培養皿置于121℃濕熱滅菌20分鐘。

4、培養基：普通營養瓊脂培養基。將培養基加熱熔化，冷卻至約45℃在無菌操作條件下將培養基注入培養皿，每皿約15m1。待瓊脂培養基凝固后，將培養基平皿放入30～35℃恒溫培養箱中培養數小時，若培養基平皿上確無菌落生長，即可供采樣用，制備好的培養基平皿應在2～8℃的環境中存放。

5、測試步驟

1）采樣方法：將已制備好的培養皿放置在預先確定的取樣點，打開培養皿蓋，使培養基表面暴露0.5小時，再將培養皿蓋上蓋后倒置。
2）培養，時間不少于48小時。每批培養基應有對照試驗，檢查培養基本身是否污染，可每批選定3只培養皿作對照培養。

3）菌落計數：用肉眼直接計數，然后用5～10倍放大鏡檢查，有否遺漏。若培養皿上有2個或2個以上菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上的菌落計數。

6、注意事項

1）測試用具要做滅菌處理，以確保測試的可靠性、正確性。

2）采取一切措施防止人為對樣本的污染。

3）對培養基、培養條件及其他參數作詳細的記錄。

4）由于細菌種類繁多，差別甚大，計數時一般用透射光于培養皿背面或正面仔細觀察，不要漏計培養皿邊緣生長的菌落，并須注意細菌菌落與培養基沉淀物的區別，必要時用顯微鏡鑒別。

5）采樣前應仔細檢查每個培養皿的質量，如發現變質、破損或污染的應剔除。

7、測試規則

1）測試狀態

（1）沉降菌測試前：被測試無塵室（區）的溫濕度須達到規定的要求，靜壓差、必須控制在規定值內。被測試無塵室（區）已消毒。

（2）測試狀態有靜態和動態兩種，并在報告中注明測試狀態。

（3）測試人員：測試人員必須穿戴符合環境潔凈度級別的工作服。靜態測試時，室內測試人員不得多于2個人。

2）測試時間

（1）對單向流，如100級凈化房間內及層流工作臺，測試應在凈化空調系統正常運行不少于10分鐘后開始。

（2）對非單向流，如10000級、100000級以上的凈化房間，測試應在凈化空調系統正常運行不少于30分鐘開始。

8沉降菌計數
1）最少采樣點數目：可按表1確定。在滿足最少測點數的同時，還宜滿足最少培養皿數，見表2。??表1最少采樣點數目

注：表中的面積對于單向流無塵室是指送風面積，對于非單向流無塵室是指房間面積。?????????表2最少培養皿數

2）采樣點的布置：工作區測試點位置離地0.8～1.5m左右（略高于工作面）?？稍陉P鍵設備或關鍵工作活動范圍處增加測點，采樣點的布置應力求均勻，避免采樣點在某 局部區域過于集中，某局部區域過于稀疏。

3）記錄：測試報告中應記錄房間溫度、相對濕度、壓差、測試狀態及測試數據。

4）結果計算：用計數方法得出各個培養皿的菌落數。平均菌落數的計算見下式：m1+m2+……+mn

平均菌落數m=n

式中：m為平均菌落數；m1為1號培養皿菌落數；m2為2號培養皿菌落數；mn為n號培養皿菌落數；n為培養皿總數。

5）結果評定：用平均菌落數判斷無塵室的空氣中的微生物。

6）無塵室（區）內的平均菌落數必須低于所選定的評定標準（見表3）。????????????????????表3

7）若某無塵室（區）的平均菌落數超過評定標準，則必須對此區域先行消毒，然后重新測試兩次，測試結果必須合格。

主要參考文獻：國家標準GB/T 16294-1996